Description
Folin & Ciocalteu′s phenol reagent is most commonly used in the Lowry method for determining protein concentration. It has also been used for the quantification of total phenolics. In this method, protein is pretreated with copper(II) in a modified biuret reagent (alkaline copper solution
stabilized with sodium potassium tartrate). Addition of the phenol reagent generates chromogens that give increasing absorbance between 550-750nm. Normally, absorbance at the peak (750nm) or shoulder (660nm) are used to quantitate protein concentrations between 1-100 mg/ml while absorbance at 550nm is used to quantitate higher protein concentrations.
In the absence of copper, color intensity is determined primarily by the tyrosine and tryptophan content of the protein, and to a lesser extent by cysteine and histidine. Copper(II) has no effect on color formation by tyrosine, tryptophan, or histidine, but reduces color formation due to cysteine.
Application
Folin & Ciocalteu′s phenol reagent has been used for the estimation of total phenolic content in samples.
توضیحات
روش فولین-سیکالتو (Folin-Ciocalteu method) که اغلب در روش لوری (Lowry method) برای تعیین غلظت پروتئین استفاده میشود، برای تعیین مقدار فنلهای کل نیز به کار میرود.
در این روش، پروتئین ابتدا با مس (II) در یک معرف بیوره اصلاحشده (محلول مس قلیایی پایدار شده با سدیم پتاسیم تارتارات) پیشتیمار میشود. افزودن معرف فنل، کروموژنها (chromogens) را ایجاد میکند که جذب آنها در محدوده 550 تا 750 نانومتر افزایش مییابد.
-
برای اندازهگیری غلظت پروتئین در محدوده 1 تا 100 میلیگرم بر میلیلیتر، معمولاً از جذب در 750 نانومتر (نقطه اوج) یا 660 نانومتر استفاده میشود.
-
برای غلظتهای بالاتر پروتئین، از جذب در 550 نانومتر استفاده میشود.
در غیاب مس، شدت رنگ عمدتاً به مقدار آمینو اسیدهای تیروزین و تریپتوفان پروتئین و به میزان کمتر به سیستئین و هیستیدین بستگی دارد. مس (II) بر رنگزایی تیروزین، تریپتوفان یا هیستیدین تأثیری ندارد، اما رنگزایی ناشی از سیستئین را کاهش میدهد.
کاربرد
برای تخمین محتوای فنلی کل در نمونهها، از معرف فنلی فولین و سیکالتو استفاده شده است.