Description
TMB substrate is a chromogenic substrate for horseradish peroxidase - HRP.
Application
TMB substrate is used in ELISA procedures, which utilize horseradish peroxidase conjugates. TMB substrate develops a soluble blue reaction product that can be read at 370 or 655 nm at 370 or 655 nm. The reaction is stopped with acid, forming a yellow reaction product which enables accurate intensity measurement at 450 nm.
How to use our TMB substrate:
Our TMB substrate is supplied as a ready-to-use peroxidase substrate containing TMB in a mildly acidic buffer. Prior to reaction with peroxidase, the substrate should be a colorless to light bluish-green solution. The substrate system develops a blue reaction product when reacted with peroxidase.
Upon reaching your assay endpoint with addition of acid, measure the TMB substrate intensity at 450 nm.
Our TMB Substrate is recommended for ELISA (microwell) procedures, and has been used in various assays, as a substrate for horseradish peroxidase antibody conjugate for detecting hendra virus glycoprotein, tetracosactide, sIgA and neutrophil extracellular traps (NETs).
3,3′,5,5′-Tetramethylbenzidine (TMB) Liquid Substrate System is not recommended for membrane applications. Since TMB substrate produces a soluble reaction product, it is not recommended for histochemistry or blotting.
توضیحات
TMB یا 3,3',5,5'-تترا متیل بنزیدین، یک سوبسترای کروموژنیک (رنگ‌زا) برای آنزیم هورس‌ردیش پراکسیداز (HRP) است. این سوبسترا در حضور آنزیم HRP و پراکسید هیدروژن، به یک محصول آبی‌رنگ تبدیل می‌شود.
کاربرد
سوبسترای TMB (3,3',5,5'-تترا متیل بنزیدین) در روش‌های آزمایشگاهی الایزا استفاده می‌شود که در آنها از آنزیم کونژوگه هورس‌ردیش پراکسیداز (HRP) بهره گرفته می‌شود.
سوبسترای TMB در واکنش خود یک محصول آبی‌رنگ محلول ایجاد می‌کند که می‌توان آن را در طول موج ۳۷۰ یا ۶۵۵ نانومتر اندازه‌گیری کرد. سپس، با افزودن اسید، واکنش متوقف می‌شود و محصول واکنش به رنگ زرد در می‌آید که این تغییر رنگ امکان اندازه‌گیری دقیق شدت رنگ را در طول موج ۴۵۰ نانومتر فراهم می‌کند.
نحوه استفاده از سوبسترای TMB
سوبسترای TMB به صورت یک سوبسترای آماده برای استفاده عرضه می‌شود که حاوی TMB در یک بافر با اسیدیته ملایم است. قبل از اینکه با آنزیم پراکسیداز واکنش دهد، رنگ سوبسترا باید بی‌رنگ تا آبی-سبز روشن باشد. در واکنش با آنزیم پراکسیداز، این سیستم سوبسترا یک محصول آبی‌رنگ تولید می‌کند.
هنگامی که آزمایش شما با افزودن اسید به نقطه پایان می‌رسد، شدت سوبسترای TMB را در طول موج ۴۵۰ نانومتر اندازه‌گیری کنید.
سوبسترای TMB برای روش‌های الایزا (میکروول) توصیه می‌شود و در آزمایش‌های مختلفی به عنوان سوبسترای آنتی‌بادی‌های کونژوگه با آنزیم هورس‌ردیش پراکسیداز برای تشخیص مواردی مانند گلیکوپروتئین ویروس هِندرا، تتراکوساکتاید، sIgA و تله‌های خارج سلولی نوتروفیل‌ها (NETs) استفاده شده است.
سیستم سوبسترای مایع ۳٬۳'٬۵٬۵'-تترا متیل بنزیدین (TMB) برای کاربردهای غشایی توصیه نمی‌شود، زیرا سوبسترای TMB محصول واکنش محلول تولید می‌کند و برای روش‌هایی مانند هیستوشیمی یا بلاتینگ که نیاز به رسوب رنگی دارند مناسب نیست.
