Description
Phenylmethanesulfonyl fluoride (PMSF) is a widely used serine protease inhibitor, effective against such enzymes as chymotrypsin, thrombin, and trypsin. PMSF acts as an inhibitor via sulfonation of the hydroxyl residues of serine residues at the reactive sites of serine proteases.
Application
PMSF is often used in lysis buffer to assist in preserving proteins of interest during protein isolation and sample preparation, by inhibiting proteases that would otherwise degrade proteins after cell or tissue lysis. PMSF is unstable in aqueous media. Thus stock solutions of PMSF are generally prepared in anhydrous organic solvents (e.g. 100% ethanol, or anhydrous isopropanol) prior to use in aqueous media.
Noted general features and benefits of PMSF include the following:
Inhibits serine proteases such as trypsin and chymotrypsin
Also inhibits cysteine proteases (reversible by reduced thiols) and mammalian acetylcholinesterase
Not as effective or as toxic as DFP
Effective concentration 0.1-1 mM
Half-life = 1 hr. at pH 7.5
Phenylmethanesulfonyl fluoride has been used in following applications:
cell fractionation.
used as a supplement in nuclear protein extraction.
inhibitor of cholesterol esterase (CE) and pseudocholinesterase (PCE).
used for the collection of blood prior to centrifugation to quantify plasma ANP levels.
Biochem/physiol Actions
Administration of PMSF produces analgesia unrelated to its anticholinesterase effect, and prolongs the analagesic effect of centrally administered β-endorphin.
توضیحات
فنیل متان سولفونیل فلوراید (PMSF) یک مهارکننده پروتئاز سرین است که به طور گسترده مورد استفاده قرار می‌گیرد و در برابر آنزیم‌هایی مانند کیموتریپسین، ترومبین و تریپسین مؤثر است. PMSF از طریق سولفوناسیون باقیمانده‌های هیدروکسیل باقیمانده‌های سرین در مکان‌های واکنشی پروتئازهای سرین به عنوان یک مهارکننده عمل می‌کند.
کاربرد
PMSF اغلب در بافر لیز برای کمک به حفظ پروتئین‌های مورد نظر در طول جداسازی و آماده‌سازی نمونه استفاده می‌شود، زیرا پروتئازهایی که در غیر این صورت پس از لیز سلولی یا بافتی پروتئین‌ها را تخریب می‌کنند، مهار می‌سازد. PMSF در محیط‌های آبی ناپایدار است. بنابراین، محلول‌های ذخیره PMSF معمولاً قبل از استفاده در محیط آبی، در حلال‌های آلی بدون آب (مانند اتانول ۱۰۰٪ یا ایزوپروپانول بدون آب) تهیه می‌شوند.
ویژگی‌ها و مزایای عمومی شناخته‌شده PMSF عبارتند از:
-
مهارکننده پروتئازهای سرینی مانند تریپسین و کیموتریپسین است.
-
همچنین پروتئازهای سیستئینی (که با تیول‌های احیاشده قابل برگشت است) و استیل‌کولین‌استراز پستانداران را نیز مهار می‌کند.
-
به اندازه DFP مؤثر یا سمی نیست.
-
غلظت مؤثر آن بین ۰.۱ تا ۱ میلی‌مولار است.
-
نیمه‌عمر آن در pH 7.5، یک ساعت است.
فنیل‌متیل‌سولفنیل فلوراید (PMSF) در کاربردهای زیر استفاده شده است:
-
جداسازی سلولی (Cell fractionation).
-
به عنوان مکمل در استخراج پروتئین هسته‌ای.
-
مهارکننده کلسترول استراز (CE) و سودوکولین‌استراز (PCE).
-
برای جمع‌آوری خون قبل از سانتریفیوژ به منظور تعیین مقدار ANP پلاسما.
کنش های بیوشیمی/فیزیولوژیکی
استفاده از PMSF باعث ایجاد بی‌دردی (analgesia) می‌شود که با اثر ضد استیل‌کولین‌استراز آن ارتباطی ندارد و همچنین اثر بی‌دردی β-اندورفین را که به صورت مرکزی (به مغز یا نخاع) تزریق شده، طولانی‌تر می‌کند.
