توضیحات
کیت استخراج DNA ستونی یکی از روش‌های استاندارد و بسیار پرکاربرد در زیست‌شناسی مولکولی برای جداسازی و خالص‌سازی DNA از نمونه‌های بیولوژیکی مختلف است. این روش به دلیل سادگی، سرعت و خلوص بالای DNA استخراج‌شده، جایگزین روش‌های قدیمی‌تر و خطرناک‌تر مانند فنل-کلروفرم شده است.
اساس کار کیت استخراج DNA ستونی:
این کیت‌ها بر پایه فناوری غشاهای سیلیکایی کار می‌کنند. ستون‌های استخراج (که معمولاً شبیه به یک میکروتیوب کوچک با یک فیلتر در پایین هستند) حاوی این غشاهای سیلیکایی هستند. مراحل اصلی کار به شرح زیر است:
-
لایز سلولی (Lysis): ابتدا سلول‌های نمونه با استفاده از بافرهای مخصوص (حاوی دترجنت و نمک) و گاهی آنزیم‌هایی مانند پروتئیناز K شکسته می‌شوند تا DNA از هسته آزاد شود.
-
اتصال (Binding): مخلوط حاصل به ستون سیلیکایی منتقل می‌شود. در شرایطی با غلظت بالای نمک و اتانول، DNA به غشای سیلیکایی متصل می‌شود، در حالی که سایر ناخالصی‌ها (مانند پروتئین‌ها و RNA) از ستون عبور می‌کنند.
-
شستشو (Washing): برای حذف کامل ناخالصی‌های باقی‌مانده، ستون چندین بار با بافرهای شستشو شسته می‌شود.
-
الوشن (Elution): در مرحله نهایی، با افزودن بافری با غلظت نمک پایین یا آب، پیوند بین DNA و غشای سیلیکا شکسته شده و DNA خالص از ستون جدا می‌شود. DNA خالص شده در یک میکروتیوب جمع‌آوری و برای آزمایش‌های بعدی آماده است.
